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GET到这些点,才能选对qPCR仪

    上次有读者给小编留言,说自己的实验室想买一台qPCR仪,由于价格不菲,就怕买错了对以后的实验和经费都带来麻烦。这里小编要说一句,好的产品越用越顺心,差的产品越用越糟心。那么今天小编就和大家介绍一下一台出色的qPCR仪需要具备哪些特点呢。

    无论是选择国产还是进口的qPCR仪,首先要从仪器光学检测的技术方案来着手,因为这是qPCR 仪的核心技术,它决定了实验的准确性、可靠性和重复性。


一、采用顶部检测CCD技术


    目前来看,顶部检测CCD技术是定量PCR仪的最佳技术方案。国内顶尖qPCR仪和国外主流qPCR仪都采用这种技术,比如美国Thermofisher的Q5/7500,ROCHE的LC480/96,BIORAD的CFX96,以及德国JENA的qTOWER,国内有朗基的Q1000/Q2000系列产品。这种顶部检测技术采用相机原理,直接从PCR管的上方对样品进行实时检测,采光面平行性好,采光面积大,因此小体积反应液都能放心使用(如图1)。

    众所周知,采用顶部检测技术的 qPCR仪所需要的反应体积只需5-10ul即可,(而其他检测方案的qPCR仪至少需要20ul以上),从而很大程度地降低了实验成本。实验达人们最清楚qPCR试剂有多贵了,能省一半的试剂就是省下大把的银子啊

图1  10ul,2倍稀释4个重复

在Q2000上获得的结果

    


二、能用0.1ml白管


     经常做实验的小伙伴知道,传统定性PCR仪常用0.2ml透明管,所以使用0.2ml透明管成了一种习惯。但是对于定量PCR仪来说,0.2ml透明管绝不是最佳选择。因为样品井无法保证始终如一的干净,透明管也不能控制光不折射。

    这里小编要告诉你一个获得最佳结果的诀窍——就是改变习惯,使用白管。因为不透明的白管能屏蔽背景噪音,即使样品井有点脏都没有关系。另外,白管还能减少光的折射损失,信噪比和灵敏度更高,因此可获得比透明管更佳的实验效果。顶部检测CCD方案绝配白管,可实现1+1>2的优势。

图2  qPCR专用0.1白管

   

     另外,0.1ml管由于光程比0.2ml管更短,因而荧光信号更稳定,灵敏度更高(可点击查看:干货 | 为什么qPCR高手都爱用0.1ml管?)。国内PCR仪一线品牌朗基科仪就是采用SSLP短光程静态荧光CCD成像技术,巧妙地将顶部检测的光程缩小到100mm(而罗氏LC480的光程达到800mm),既可使用白管,又适用0.1ml管。这项创新技术使得朗基Q2000型96孔荧光定量PCR仪的体积更是做到了进口同类产品的一半甚至更小,大大节约了实验室空间。


图3   朗基Q1000 & Q2000荧光定量PCR仪



三、升降温速率越快越好


    无论是普通pcr仪还是荧光定量pcr仪,升降温速率都决定了实验所需的时间,当然是越快越好咯。能快速达到目标温度,从而缩短实验时间和提高工作效率肯定是一台优秀的qPCR仪应具备的品质。而对于PCR仪的变温速率来说,每秒增加1度都是半导体技术的一次飞跃。


四、通量越大越好


    仪器的通量,包括孔数和通道数。目前市场上有8孔、16孔、48孔、96孔,还有384孔,通道数有二通道、四通道、五通道和六通道可以选择。那我们应该怎么选呢?!


    买产品并不只为当下需要,更多的要考虑未来,当然是孔数越多越好,通道数越多越好。无论是科学研究还是疾病诊断,都会越来越多地使用高通量荧光定量PCR仪。需要注意的是,有些进口厂家的仪器只对自家生产的多通道染料开放,所以有较大的局限性,选择时需谨慎。


五、软件功能越多越好


    要说硬件是骨,软件就是血肉灵魂。出色的软件不仅赋予仪器齐全的功能、简便的操作,还能带来美好的客户体验和完善的实验结果。相对定量、绝对定量、熔解曲线、基因分型(SNPs)和阴阳性判定这些都是qPCR软件必不可少的功能,如果有HRM和统计学分析模式功能那就更完美了。


    在了解完这几点之后,小伙伴们应该心中自有一本谱了吧?小编希望各位都能买到一台称心如意的qPCR仪。



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