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明白之间——说说荧光定量PCR实验耗材的选择


小朗课堂


前两天,小朗在与某实验室研究员交流时了解到这么一个情况,他们在qPCR实验时使用透明管,得到的实验结果荧光信号值比较低,曲线被压得很低,坐标轴也不太能自适应曲线,显示如下图。


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而正常情况如下图,纵坐标的范围是可以随着曲线最大荧光信号值而变化的,并可获得一条漂亮的S曲线。


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明白了这个情况后,小朗为其推荐了白管,更换成白管后,问题就迎刃而解了。


那么,问题来了,

为何做qPCR实验时一定要用白管呢?

荧光信号值与哪些因素有关呢?

我们一起来学习一下吧~



白管PK透明管

PCR管/板常见的有白色和透明两种。在传统PCR实验中,两者在使用效果上没有太大差异,相比较透明管更为方便,因为实验者更容易看清楚试剂加上与否。但在荧光定量PCR实验中,白管的优势就凸显出来了。


优势一: 白管管壁支持一致的信号反射,提高qPCR结果的一致性。


qPCR实验的核心数据是Ct值,而荧光信号是Ct值计算的数据来源,所以管内的荧光能否完好地传递至顶部的检测器是至关重要的。


如下图是三种不同透明度的管子,因为透明管四周均是透明的,对于底部试剂激发出来的荧光会散向四面八方,管内的荧光信号只有少量能到达管顶部,最终只有少量信号进入检测器,且管间荧光信号不一致。


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图1 白管和透明管内部荧光信号路线图


然而,如图1所示,与其他管材相比,白管管壁不透明,几乎没有信号丢失,且隔绝了样品台污染的荧光信号干扰,减少了相同样本孔间差异。



优势二: 白管支持最大限度的信号传输,改进对低拷贝数样本的检测,提高灵敏度。


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图2 白管和透明管检测信号对比图


从图2中可以看出,同样试剂量的情况下,到达检测器的信号强度,使用白管明显高于透明管。因此相比于透明管,使用白管可明显提高检测器检测到的信号强度,提高qPCR数据的灵敏度。


优势三: 支持更小体系扩增,节约实验成本。


正因为白管有着高灵敏度的特性,使用白管可以采用小体积反应,从而可减少实验试剂量,大大节省成本~


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图3 白管扩增结果展示图


国际一线品牌也同样证实白管更适合实时荧光定量实验的结论。

赛默飞

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如上图,qPCR使用透明和白色耗材的结果比较:

(A)与透明孔相比,白色孔Ct值更低(灵敏度更高)。

(B)白色孔在技术重复中也表现出更高的一致性。

在设置实时PCR或qPCR的反应时,与透明耗材相比,我们更推荐使用白色耗材,以实现灵敏和准确的荧光检测。

                                               ——赛默飞生命科学


Jena

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Sarstedt

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Eppendorf

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那么荧光定量PCR仪需要采用

什么技术才能满足使用白管呢?

我们来看一下

国际主流品牌的定量PCR仪产品,

一探究竟吧~


首先我们来看一下赛默飞的高端系列Q5和Q7,他们用的是CCD顶部检测的技术方案,再来看一下罗氏的旗舰产品LG480,我们可以看到,他们用的也是CCD顶部检测技术。

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朗基是国内第一家全部采用顶部CCD检测技术的定量PCR仪厂家。

机器

朗基奥金系列荧光定量PCR系统


顶部CCD检测技术光学部件固定,稳定性好,故障率低,对荧光信号的接收和处理能力强,是定量PCR仪检测技术的大势所趋。


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顶部CCD检测技术


此外,同样是白管,我们实验证明白管的质量高低也会影响荧光信号值的大小。如下图:

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结果表明,相较于其他品牌白色管和透明管的扩增曲线,朗基标配的白色管的荧光信号值更强,曲线重合度更好。


综上所述,

在进行qPCR实验时,

使用白管和顶部检测技术的qPCR仪,

可获得更佳实验结果。


朗基奥金系列荧光定量PCR仪

采用顶部CCD检测技术,

配套的管材都是白管,

也可单独采购白管,

欢迎选购朗基产品,

联系我们哦~


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